04 · 体内CAR-T监测 解决方案

体内CAR-T整合位点
追踪方案

通过液相捕获及LM-PCR技术对临床样本中CAR-T整合位点进行动态监测,评估克隆扩增安全性,为CAR-T细胞治疗产品的临床安全监控提供精准数据支持。

LM-PCR液相捕获克隆追踪临床样本

技术背景与原理

回输后动态监测整合位点与载体拷贝,用于评估优势克隆、多样性丧失及与插入相关的生物学风险。实验上常联合接头扩增、靶标深度测序、数字 PCR 与单细胞层级的受体库分析。其科学问题与“整合是否向少数克隆富集、是否与血液学变化相关”的假设一致。

方案流程

01

临床样本处理

外周血及骨髓样本的CAR-T细胞富集与DNA提取,保障样本质量与检测灵敏度。

02

LM-PCR整合位点扩增

采用连接介导PCR(LM-PCR)技术,高效扩增载体-基因组连接片段。

03

液相捕获深度测序

液相捕获富集整合区域,高通量测序精准鉴定整合位点与克隆组成。

04

克隆动力学分析

纵向追踪各时间点克隆比例变化,及时预警异常克隆扩增。

检测方法矩阵

LM-PCR慢病毒整合位点分析
液相捕获整合位点深度测序
体内CAR-T克隆追踪
整合位点扩增子验证
scVDJ单细胞克隆多样性
ddPCR拷贝数定量

参考文献

Hacein-Bey-Abina S, et al. LMO2-associated clonal T cell proliferation in two patients after gene therapy for SCID-X1. Science. 2003;302(5644):415–419意义与启发:确立整合相关克隆性 T 扩增的临床可观察性,是长期随访与整合监测策略的参照案例。
Howe SJ, et al. Insertional mutagenesis combined with acquired somatic mutations causes leukemogenesis following gene therapy of SCID-X1 patients. J Clin Invest. 2008;118(9):3143–3150意义与启发:将载体插入与后续体细胞变异共同纳入白血病发生机制,说明监测需覆盖时间维度上的克隆演变。

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